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北京单克隆抗体

时间:2020-4-15 9:55:38  来源:http://bj.saiboerbio.com/product541445.html

北京单克隆抗体的制备和冻存


挑选出的阳性细胞株应尽早进行抗体制备,因为融合细胞随培育时间延长,产生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方式。一是增量培育法,即将杂交瘤细胞在北京单克隆抗体外培育,在培养液中分离北京单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备,一般应用无血清培养基,以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠,先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射,一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生,每只小鼠可收集510ml的腹水,有时甚至超过40ml。该法制备的腹水单克隆抗体含量高,每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外,腹水中的杂蛋白也较少,便于抗体的纯化。接种细胞的数量应适当,一般为5×105/鼠,可根据腹水发育状况适度调整。

选出的阳性细胞株应尽早冻存。冻存的温度越低越好,冻存于液氮的细胞株活性仅有轻微的降低,而冻存在-70℃冰箱则活性改变较快。细胞不同于菌种,冻存过程中需格外小心。二甲亚砜(DMSO)是普遍应用的冻存保护剂。冻存细胞复苏后的活性多在50%~95%之间。如果低于50%,则说明冻存复苏过程有问题。

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