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赛博尔品牌推新品:优化的北京IgM纯化类单抗快速纯化试剂盒!

时间:2019-11-9 15:12:00  来源:http://bj.saiboerbio.com/news159592.html

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广大单抗工作者可能都遇到这个问题,IgM纯化类单抗无论如何都纯化不好。用进口的柱子也很难得到理想的结果,不是得率太低就是活性不好,长期以来困扰着大家。赛博尔的科研人员经过深入细致的大量研究与优化终于取得重大成果,让IgM纯化类单抗的纯化变得简单高效,可操作性强;北京抗体活性得到极大的保持。这一成果经反复验证得以肯定,从此您不用再为它发愁了。

大多数IgM类北京抗体是优球蛋白不溶于水,故可用双蒸水透析纯化IgM。对那些溶于水的IgM类北京抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤)进一步纯化。


颗粒排斥层析(size-exclusion chromatography)法又称分子筛层析或凝胶过滤,是利用微孔凝胶分离不同大小分子的抗体,可用于样品中IgG和IgM的分离,常用于对硫酸铵粗提物的进一步纯化。通过该法纯化所得抗体可用于Ig分子片段的制备、FITC、生物素或同位素标记。


一、材料和试剂


1. 抗血清,杂交瘤腹水或其上清,硫酸铵沉淀粗提γ球蛋白。


2. 含0.02%NaN3 的硼酸缓冲液,PBS。


3. 透析袋;26mm×900mm层析柱。


4. 适当筛孔的颗粒排斥(SE)凝胶(AcA Ultragel-或Sephacryl S-200(Pharmacia LKB)。


5. 蛋白透析、SE层析和SDS-PAGE所需的其他试剂和器材。


二、操作步骤


1. 待提取样品11,000~13,000r/min(15,000~20,000×g),4℃或室温离心,除沉淀。


2. 上清液对双蒸水透析4℃24h。


3. 11,000~15,000r/min 4℃ 或室温离心1h,留沉淀。


4. 制备SE凝胶层析柱,以硼酸缓冲液平衡。


5. 将步骤3沉淀或饱和硫酸铵粗提γ球蛋白以3~5ml硼酸缓冲液溶解,缓慢加样。


6. 以硼酸缓冲液洗脱蛋白质,并收集100管(每管为柱床体积的1%),IgM在洗脱液的第一个蛋白峰。


7. 收集Ig蛋白峰,分别合并,透析浓缩,紫外分光光度计OD 280nm测定Ig含量,SDS-PAGE鉴定IgM纯度。


8. 以1~20mg Ig/ml硼酸缓冲液置4℃或-70℃保存。

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